本发明属于生物技术领域，主要是一种打靶载体及整合外源基因至小鼠DC‑SIGN外显子7位点构建BAC克隆的方法和应用，一种靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.14所示，命名为打靶载体pL451‑DCSIGN本发明提供了一个新的能实现靶向整合的位点序列，利用该位点可构建靶向插入外源基因的打靶载体，并验证了利用该打靶载体能高效整合外源基因至小鼠DC‑SIGN BAC克隆DC‑SIGN外显子7位点，后续得到的靶向插入外源基因的DC‑SIGN BAC，可以用于构建靶向插入外源基因的小鼠胚胎干细胞，从而为构建转基因细胞系以及小鼠建立了基础。
本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV‑LoxP MAI2L‑MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台
本发明提供了一种打靶载体、重组Huh7细胞系及构建方法和应用，属于基因工程技术领域；所述打靶载体包括基因MFSD2A，所述打靶载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了一种基于上述方案所述打靶载体CL‑YK2‑001‑A构建重组Huh7细胞系的方法，包括以下步骤：将所述打靶载体CL‑YK2‑001‑A和Cas9/sgRNA质粒转染Huh7细胞，得到重组Huh7
